2000年，于娜前往北京发展并加入了新丝路模特公司，经过一系列的培训，她成为了新丝路模特公司的签约模特并陆续登上了京城几家服装、化妆、健康类杂志的封面；5月，参加首届中国内衣模特大赛并取得了的第4名成绩；6月，她还担任了北京国展中心大型车展的现场模特，9月，于娜在新丝路中国模特大赛北京赛区比赛中一举夺冠，并作为新丝路公司的模特新秀随团赴纽约参加了中国文化美国行的中国服装服饰展演；随后，她参加了新丝路中国模特大赛总决赛，并最终以优异的表现获得了大赛的冠军；11月，于娜又在北京世界超模大赛上获得了最佳亚洲形象奖；12月，她还在中国国际时装周上获得了最佳模特第3名[7]。
2002年，于娜与印小天、刘烨、傅晶联袂主演了根据海岩同名小说改编的都市爱情剧《拿什么拯救你，我的爱人》，并因在剧中饰演美丽温柔，且天真善良的女主角罗晶晶而被更多观众所熟悉[8]，而她也由此正式进入演艺圈；同年，她还与孙俪、何润东、印小天合作出演了爱情偶像剧《一米阳光》[9]。
2003年，于娜与程煜、牛振华、于小慧共同出演了现代警匪剧《荣誉》[10]；同年，她还与何炅搭档主演了贺岁话剧《想吃麻花现给你拧》[11]。
